二手高效液相色譜儀工作時，儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出。
 

　　二手高效液相色譜儀通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數據處理系統(tǒng)。
 

　　四元低壓梯度的混合比例是通過控制不同流路的電磁閥的開閉時間長短來控制的，理論上混合的比例也是準確的，但是實際上電磁閥的開閉會有一個延遲，無論它動作多么快，總還是需要一點時間的。比如A路和B路各50%混合，在單位時間內，A路和B路的電磁閥各開通50%的時間，這時問題不大，電磁閥的延遲影響可以通過調整補償系數來盡量彌補。但是如果ji端一點的情況，A路99%，B路1%，這種情況下單位時間內，A路的電磁閥開通99%的時間，B路只占1%，時間是很短的，這時B路電磁閥的延遲就影響很大了，甚至可能延遲的時間比工作的時間還要長，而高壓梯度就不會存在這種問題。
 

　　對檢測器的要求：靈敏度高、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、死體積小、對溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測器、熒光檢測器、示差檢測器等。示差檢測器是一種通用型檢測器，理論上可以檢測幾乎所有的化合物。其原理是基于含樣品的洗脫劑和洗脫劑二者折光指數的差異。示差檢測器受壓力變化、溫度變化、流動脈沖的影響較大，不適合進行梯度洗脫。